分析方法开发:HPLC对比HPLC / MS

分析检测的发展是药物发现的重要组成部分,用于寻找新的药物实体并支持从临床前研究到临床研究的研究和开发。在此过程中,新用户最常遇到的问题是:我应该使用高压液相色谱HPLC)还是液相色谱 - 质谱联用(LC-MS)来设计检测?色谱条件与样品分析的质谱参数相比更重要吗?
 
对第一个问题的简单回答是:它取决于实验的目标。每种方法(HPLC和LC-MS)都有其自己的优缺点来分析样品。高效液相色谱方法的开发和验证包括选择专用于分析物分离度和HPLC色谱柱保留的参数,如色谱柱类型,色谱柱的尺寸和键合相,流动相溶剂,样品制备,使用的波长(紫外可见/荧光/放射性) 。然而,LC-MS包括对目标分析物具有选择性的MS或MS / MS参数(去壳电位,碰撞能量,入射电位,离子化类型等)的典型LC分离和优化。
 
对于人血清中非靶向的全球分析,我们使用LC-MS进行HPLC分析。这是因为MS可以定量地在单次运行中有效识别多个分析物,而它需要额外一层LC优化以仅通过HPLC识别多种分析物。此外,样本复杂性决定了要使用的化验类型。例如,对于人体血液,血浆或细菌提取物的分析,鉴于质谱仪器的高灵敏度和特异性,良好的LC-MS方法将有助于分析甚至低浓度的分析物。此外,我们还修改了LC条件以避免基质效应和分析物分辨率。
 
LC-MS的另一个重要生物应用是确定蛋白质的活性状态/折叠状态的能力。不像等的传统技术的ELISA或western印迹,其利用定量/定性分析,我们设计了LC-MS测定以确定活性蛋白为II型糖尿病由塔底向上方法的百分比。这是一项高级技术,需要同位素标记的蛋白质来定量生物基质中的活性蛋白质。
 
有时,HPLC可以成为样品分析的唯一独立技术。选择正确的色谱柱,流动相溶剂和色谱条件(梯度,温度等)非常有用,特别是对于异构分离。在m / z相同的手性或几何异构体中,MS单独不能帮助区分异构体。对于这些分析,我们用手性试剂对样品进行衍生化处理,并设计了可以色谱分离异构体混合物的特定HPLC方法。
 
总之,随着最新技术的进步,LC-MS分析可以通过HPLC检测和MS分析提供分析物的双重确认; 而在诸如手性分离和异构体分离的情况下,HPLC条件更为重要。
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